بررسی مقایسه ای روش های مولکولی pcr-rflp، آلل اسپسیفیک pcr و سکوئنس جهت تشخیص سریع مقاومت به ایزونیازید در سویه های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

زمینه: ایزونیازید یکی از داروهای خط اول درمان سل می باشد که مقاومت به آن به صورت فزاینده ای گزارش می شود. در مطالعه حاضر دو روش مولکولی جهت تشخیص سریع مقاومت سویه های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به ایزونیازید طراحی و با نتایج سکوئنس مورد مقایسه قرار گرفتند. مواد و روش ها: در این مطالعه 60 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، که با روش تعیین حساسیت دارویی (dst) مقاومت به ایزونیازید در آن ها اثبات شده، استفاده گردید. سه روش مولکولیsequencing ،pcr-rflp و allele specific-pcr جهت تعیین موتاسیون در کدون 315 مرتبط با مقاومت به ژن katg مقایسه شدند. بدین منظور با کمک پرایمرهای اختصاصی که قادر به تشخیص موتاسیون در این کدون بودند، روش آلل اسپسفیک اجرا گردید. علاوه بر این، در روش pcr-rflp از آنزیم hpaii جهت برش آنزیمی محصولpcr استفاده شد، عدم برش توسط آنزیم به عنوان رخداد موتاسیون در نظر گرفته شد. یافته ها: بدین منظور سویه های حساس، مقاوم به دارو و سویه استاندارد h37rv مورد استفاده قرار گرفتند. از سویه های مورد مطالعه، تعداد 27 سویه مقاوم و 33 سویه حساس به ایزونیازید بودند. نتایج سکوئنس به عنوان استاندارد طلایی مشخص نمود که as-pcr و pcr-rflp به خوبی قادر به تشخیص موتاسیون در کدون 315 در سویه های مقاوم فنوتیپی با حساسیت و ویژگی به ترتیب 48/81 درصد و 100 درصد بودند. نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که روش های pcr-rflp و as-pcr طراحی شده می توانند به عنوان روش های ساده و سریع برای تعیین حساسیت و مقاومت به ایزونیازید در سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرارگیرند. پیشنهاد می شود جهت کاهش ریسک خطا، با توجه به ساده و کم هزینه بودن به صورت همزمان از هر دو تست برای تشخیص مقاومت به ایزونیازید استفاده شود.